Κύτταρα σποράς, διάβασης και παγώματος

Κύτταρα σποράς, διάβασης και παγώματος

Σπέρνοντας κύτταρα

1. Κύτταρα: το πάγωμα αργά, ξεπαγώνει πραγματικά ΓΡΗΓΟΡΑ!!

2. 14 μιλ. RPMI στη φιάλη γ-75

3. χύνουν 1 μιλ. των παγωμένων κυττάρων αποθεμάτων

4. διαδίδουν έξω τα κύτταρα με το λίκνισμα της φιάλης

5. DMSO είναι τοξικό - το παγώνοντας μέσο έχει 10% DMSO και 20% PBS

6. μετά από να σπείρουν, παίρνουν τα κύτταρα στο σωλήνα γερακιών 15 μιλ., περιστροφή κάτω σε 1600 περιστροφές/λεπτό, παίρνουν έναν σβόλο

7. χύνουν το υπερκείμενο νερό μας, και προσθέτουν 15 μιλ. πιό μέσα

8. επαναρτούν το σβόλο στα φρέσκα μέσα 3 μιλ., περιστροφή πάλι, παίρνουν έξω το μέσο πάλι

9. φρέσκα 3 μιλ. RPMI, επαναρτούν, βαλμένος στη φιάλη που περιέχει 12 μιλ. RPMI

Διασχίζοντας κύτταρα

1. αφαιρεί το μέσο

2. 10 μιλ. PBS πλένουν τη φιάλη γ-75

3. αφαιρούν PBS, που τίθεται σε 1.5 μιλ. trypsin

. trypsin 4 γύρω με το λίκνισμα, επωάζει σε 37 βαθμούς για 10 λεπτά

5. παίρνουν 3 νέες φιάλες, που τίθενται στο μέσο 12 μιλ. σε κάθε ένα (η υποομάδα εξαρτάται από τη γραμμή κυττάρων)

6. σταματούν το trypsinization με την προσθήκη 5 μιλ. του μέσου

7. διανέμουν ομοιόμορφα τα κύτταρα στις νέες φιάλες (2 μιλ. ανά φιάλη εάν 3 φιάλες)

8. μετά από να χωρίσουν, πάντα ανάγκη να αλλάξουν/αλλάζουν το μέσο η επόμενη ημέρα

Παγώνοντας κύτταρα

1. μετατρέπει τα κύτταρα σε θρυψίνη όπως προηγουμένως αναφέρονται

2. βάζουν τα κύτταρα στο σωλήνα γερακιών 15 μιλ.

. περιστροφή 3 κάτω από τα κύτταρα σε 1200 περιστροφές/λεπτό

4. απορροφούν έξω το υπερκείμενο νερό

5. επαναρτούν σε 1 μιλ. το παγώνοντας μέσο

6. μεταφέρουν 1 στους σωλήνες cryo 2 μιλ.

7. τοποθετούν στο στενό εμπορευματοκιβώτιο με τον ξηρό πάγο λειτουργώντας

8. όταν τελειώνεται βαλμένος στο υγρό άζωτο

Παρακαλώ αναφερθείτε στα άλλα πρωτόκολλα κυτταροκαλλιέργειάς μας.